Nous avons achevé le développement d’une méthode d’analyse par oligonucléotides et sa validation GLP afin de quantifier l’aptamère du client dans le plasma de rat, de lapin et humain, ainsi que dans l’urine humaine, à l’aide d’une analyse par hybridation d’oligonucléotides.
Cette analyse par oligonucléotides comprenait un ELISA d’hybridation en sandwich utilisant un oligonucléotide complémentaire pour la capture et un oligonucléotide complémentaire marqué à la biotinepour la détection, suivie de l’ajout de streptavidine SULFO-TAG et de la détection de la réaction électrochimiluminescente (ECL) sur la plateforme Meso Scale Discovery (MSD) pour la quantification des oligonucléotides.
Solution
L’un de nos clients avait besoin d’un test PK d’oligonucléotides reproductible et hautement sensible pour son médicament à base d’oligonucléotides. À cette fin, nous avons mis en œuvre un test basé sur la plateforme Meso Scale Discovery, associé à une analyse d’hybridation d’oligonucléotides.
Notre équipe expérimentée a optimisé chaque étape de cette méthode ECL d’hybridation d’oligonucléotides afin d’améliorer les performances et la robustesse du test d’oligonucléotides.
Dans un premier temps, notre équipe a utilisé une approche de type « checkerboard » afin de déterminer les concentrations optimales pour les oligonucléotides de revêtement et de détection, les conditions de blocage, la température de dénaturation des oligonucléotides, l’annexion et l’hybridation des oligonucléotides, ainsi que la durée d’incubation. Nous avons également déterminé la dilution appropriée de l’échantillon, car cet analyte présentait un « effet hook » à des concentrations plus élevées.
La plaque d’analyse d’oligonucléotides MSD Multi-Array a été enduite de l’oligonucléotide de capture pendant la nuit. Les étalons et les échantillons ont été préparés, inactivés par chauffage, puis combinés à l’oligonucléotide de détection marqué à la biotine. Ce mélange a ensuite été soumis à un recuit dans un thermocycleur, puis incubé dans la plaque enduite afin de permettre l’analyse par hybridation d’oligonucléotides. Nous avons ensuite éliminé par lavage les oligonucléotides non liés et détecté le signal ECL de l'oligonucléotide hybridé à la streptavidine-SULFO-TAG sur un imageur MSD afin de quantifier les oligonucléotides.
Résultat
Nous avons mis au point une méthode d’analyse par oligonucléotides fiable et transposable pour la bioanalyse d’aptamères d’ARN dans différentes matrices biologiques. De plus, ces tests PK ont montré un profil dose-dépendant et ont été soumis par le promoteur aux autorités réglementaires pour la quantification des oligonucléotides.
Les aptamères oligonucléotidiques présentant une grande valeur thérapeutique et diagnostique et s’avérant particulièrement utiles pour l’administration spécifique à un type cellulaire d’autres thérapies à base d’ARN (telles que les siRNA), on assiste à un regain d’intérêt pour le développement de nouveaux aptamères en tant qu’agents thérapeutiques.
Par conséquent, une analyse robuste et reproductible des oligonucléotides pour les études pharmacocinétiques (PK) et pharmacodynamiques (TK) peut contribuer de manière significative à accélérer le développement de ces nouveaux agents thérapeutiques.
Homologué et contrôlé par différentes autorités de régulation
Pour toute question concernant votre test ELISA d'hybridation MSD, votre analyse d'oligonucléotides ou votre test d'oligonucléotides, veuillez contacter notre scientifique
Articles connexes
Test d'expression génique TaqMan, développement d'un test de variation du nombre de copies, validation nGLP et analyse d'échantillons
Analyse des variations génomiques – Analyse des polymorphismes nucléotidiques simples (SNP) par TaqMan
Bioanalyse par LC-MS d'oligonucléotides antisens (ASO) à l'aide de la spectrométrie de masse et de la chromatographie par paires d'ions
Analyse par LC-MS de l'épigallocatéchine gallate (EGCG) dans le sérum humain VcEDTA
Méthode LC-MS pour la détermination de la proline et de l'hydroxyproline dans les tissus de souris
Méthode LC-MS pour l'analyse des adduits d'ADN dans des échantillons in vitro d'origine cellulaire
Méthode LC-MS pour les systèmes de libération de médicaments avec des stents coronariens libérant de l'évérolimus
Spectrométrie de masse des acides aminés, analyse quantitative des acides aminés par LC-MS
Développement d'une méthode LC-MS et validation GLP pour l'analyse d'échantillons plasmatiques pharmacocinétiques
Test de réanalyse des échantillons collectés (ISR), exigences de la FDA et évaluation de l'étude
Prélèvement, collecte et analyse de gouttes de sang séché (DBS)
Votre partenaire pour la qualité, la sécurité et la conformité
Le secteur des sciences de la vie exige un savoir-faire spécialisé et un accompagnement fiable. Grâce à notre expertise approfondie, nous aidons les entreprises à respecter les exigences réglementaires, à garantir la qualité et à continuer d'innover en toute confiance.