La quantification des acides aminés dans le plasma humain nécessite des méthodes bioanalytiques et des tests biomoléculaires sélectifs, fiables et précis, tels que l'analyse des acides aminés par LC-MS. Les acides aminés sont présents à des concentrations variables dans des matrices biologiques complexes et se caractérisent par une polarité élevée ainsi qu’un faible poids moléculaire.
Les bioanalystes utilisent différentes méthodes d’analyse des acides aminés, telles que la fluorescence, l’ultraviolet, les procédés électrochimiques et la spectrométrie de masse pour la détermination des acides aminés, ainsi que l’électrophorèse capillaire ou la HPLC pour la séparation. Les techniques d’ultraviolet et de fluorescence nécessitent généralement une étape de dérivatisation, qui améliore la sensibilité de détection et les possibilités de séparation. La préparation des échantillons est toutefois un processus fastidieux qui allonge la durée de l’analyse.
Outre la co-analyse de plusieurs analytes, nous avons également dû tenir compte de leur faible poids moléculaire. Les concentrations endogènes élevées de ces acides aminés dans la matrice biologique ont constitué un autre défi majeur pour nos scientifiques. Notre équipe a été chargée de quantifier ces acides aminés, présents à des concentrations variables et présentant une forte polarité, à l’aide de méthodes bioanalytiques sélectives, fiables et précises d’analyse des acides aminés.
Les récentes avancées technologiques ont permis la détection d’acides aminés non dérivés par spectrométrie de masse en tandem. La spectrométrie de masse en tandem pour les acides aminés offre une sensibilité et une sélectivité élevées et se caractérise par un protocole de préparation des échantillons simplifié. Néanmoins, la quantification des acides aminés non dérivés lors de l’analyse par UHPLC reste un défi en raison des effets variables des matrices biologiques et des temps de rétention défavorables.
Solution
Nos scientifiques expérimentés ont choisi d’utiliser la détection technologiquement avancée des acides aminés non dérivés par spectrométrie de masse en tandem, plutôt que de recourir à des approches conventionnelles telles que la fluorescence, l’ultraviolet, l’électrochimie et la spectrométrie de masse.
Nous avons préparé tous les échantillons en vue de la détermination des acides aminés conformément aux directives de la FDA. Notre approche innovante et le respect des protocoles établis garantissent des méthodes d’analyse des acides aminés précises, permettant d’obtenir des informations complètes sur les processus biologiques et les applications diagnostiques. Vous trouverez ci-dessous les étapes suivies par notre équipe pour l’analyse quantitative des acides aminés :
- Développement de deux méthodes distinctes d’analyse des acides aminés par LC-MS pour l’analyse respectivement de 17 et de 5 (sur les 21) acides aminés présents dans le plasma humain
- Nous avons séparé ces acides aminés par chromatographie liquide en phase inverse, ce qui a permis d’obtenir une symétrie des pics et une meilleure rétention pour tous les analytes
- En utilisant un cocktail composé d’un étalon interne marqué de manière stable et d’un mélange d’acides aminés canonique pour tous les analytes concernés, nous avons garanti des effets de matrice minimes et une grande précision
- Nous avons réalisé une validation de méthode LC-MS/MS conforme aux bonnes pratiques de laboratoire (BPL) afin de quantifier ces acides aminés dans un petit volume (75 µL) de plasma humain
- Les acides aminés ont été détectés par fragmentation in-source et spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS) dédiée aux acides aminés
- Pour cinq niveaux de concentration différents utilisés comme contrôles de qualité, une exactitude et une précision intra-série et inter-série acceptables ont été obtenues
- L'acquisition des données a été réalisée à l'aide du logiciel Analyst v1.7 de Scienx et leur traitement à l'aide de Watson LIMS™ v7.6
Résultat
NorthEast BioLab a développé et validé avec succès une méthode LC-MS/MS robuste et transférable pour l’analyse quantitative de 21 acides aminés dans des matrices biologiques. Nous pouvons appliquer les résultats de nos méthodes d’analyse des acides aminés par LC-MS, obtenus par HPLC, dans de nombreuses études nécessitant la quantification des acides aminés en tant que biomarqueurs. Cela peut aider nos clients à explorer de nouvelles voies de traitement et thérapies dans lesquelles les acides aminés jouent un rôle. NorthEast BioLab garantit des méthodes d’analyse des acides aminés fiables et complètes, qui favorisent l’innovation et contribuent au progrès scientifique.
Parmi les caractéristiques remarquables de notre méthode combinée d’analyse des acides aminés par LC-MS pour 21 acides aminés, on peut citer notamment :
- Évaluation critique de différents paramètres, notamment la plage d’étalonnage, l’exactitude et la précision, le transfert des analytes, l’intégrité de la dilution, l’effet de matrice et le taux de récupération des analytes
- L’intensité du signal de l’analyte à QC_LLQ était ≥ cinq fois supérieure à celle des calibrateurs zéro, ce qui indique une sensibilité supérieure de la méthode LC-MS/MS
- Les plages d’exactitude et de précision intra-série et inter-série (%CV) pour QC_Low, QC_Mid et QC_High était conforme aux critères d'acceptation des lots, ce qui indique que l'analyse des acides aminés par LC-MS fournit des résultats fiables, exacts et reproductibles pour les acides aminés cibles
- Mise au point d’une méthode bioanalytique reproductible basée sur la LC-MS/MS pour la quantification simultanée de l’acide L-aspartique, de la glycine, de la DL-alanine, de la L-asparagine, du L-tryptophane, L-phénylalanine, la DL-arginine, la L-isoleucine, la DL-leucine, la L-(+)-lysine, L-proline, DL-sérine, DL-tyrosine, L-valine, trans-4-hydroxy-L-proline, DL-5-hydroxy-DL-lysine et L-histidine dans le plasma humain
Nos services actuels d’analyse des acides aminés, qui font appel à la spectrométrie de masse des acides aminés, fournissent de manière fiable des résultats fiables, précis et reproductibles pour les acides aminés que vous avez sélectionnés. Les étalons marqués en interne contribuent à réduire les effets de matrice, ce qui favorise une analyse quantitative précise de ces analytes importants dans les matrices biologiques.
Le développement et la validation de notre méthode LC-MS d’analyse des acides aminés, qui permet de quantifier 21 acides aminés dans le plasma humain, garantissent des résultats précis et fiables. L’analyse quantitative des acides aminés est essentielle à la compréhension des processus biologiques et au diagnostic des maladies. Nos méthodes d’analyse des acides aminés utilisent des équipements de pointe pour atteindre un haut niveau de précision et de sensibilité. Faites confiance à notre expertise dans le domaine de l’analyse quantitative des acides aminés pour soutenir efficacement vos recherches et vos essais cliniques.
Enregistré et contrôlé par différentes autorités de surveillance
Pour toute question concernant vos méthodes d'analyse des acides aminés par LC-MS et l'analyse quantitative des acides aminés, veuillez contacter notre scientifique
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