Nous avons réalisé cette analyse multiplexe des cytokines, ou ce test de cytokines, ainsi que l'évaluation de l'adéquation du test immunologique à l'usage prévu, à l'aide de Meso Scale Discovery, afin de quantifier simultanément huit (8) biomarqueurs inflammatoires : IL-1 bêta/IL-1F2, IL-2, IL-6, IL-8/CXCL8, IL-10, IFN-alpha-2a, IFN-gamma et TNF-alpha dans le plasma humain.
Chaque étape de ce test multiplex MSD-ECL de quantification des cytokines doit être optimisée afin d’améliorer la reproductibilité et la robustesse.
Solution
L’un de nos clients souhaitait déterminer le statut inflammatoire des participants à une étude clinique après l’administration de son médicament. À cette fin, nous lui avons recommandé un panel 8-plex basé sur la technologie Meso Scale Discovery pour les cytokines et chimiokines pro-inflammatoires V-PLEX.
Ce test de cytokines basé sur la plateforme MSD utilise des cocktails d’anticorps pour les huit analytes dans une configuration sur plaque à 96 puits, afin d’obtenir un test reproductible présentant une sensibilité et une spécificité élevées pour ces biomarqueurs. Grâce aux capacités multiplexes de la plateforme Meso Scale Discovery pour les biomarqueurs inflammatoires, plusieurs cytokines peuvent être quantifiées simultanément à partir d’un seul échantillon, ce qui offre un aperçu complet des réactions immunitaires et de l’état inflammatoire. Cette approche est d’une importance cruciale dans les tests de quantification des cytokines, car l’évaluation de différents marqueurs inflammatoires offre une vision globale de la dynamique du système immunitaire et de l’efficacité du traitement.
La plateforme Meso Scale Discovery offre des analyses biochimiques dotées d’une sensibilité améliorée, d’effets de matrice minimisés et d’une plage dynamique plus large, ce qui permet de mesurer plusieurs analytes à partir d’un seul échantillon (c’est-à-dire le multiplexage). Cette capacité est particulièrement précieuse dans le cadre des dosages de cytokines. De plus, la plateforme MSD-ECL offre une grande stabilité et n’est pas radioactive grâce à des marqueurs faciles à conjuguer. Ces avantages font de MSD une alternative solide aux méthodes colorimétriques traditionnelles telles que l’ELISA pour la quantification des cytokines.
Ici, nous avons enduit la plaque de test MSD Multi-Array pour cytokines pendant une heure à température ambiante (TA) avec un cocktail d’anticorps de capture, ce qui a permis la détection de multiplexes de biomarqueurs inflammatoires. Nous avons ensuite préparé des courbes d’étalonnage, des contrôles de qualité et des échantillons conformément aux exigences réglementaires de la FDA relatives à la validation des méthodes bioanalytiques et à l’analyse des échantillons. Nous avons ensuite déposé une solution de blocage à 1 % de BSA, les étalons, les contrôles de qualité et les échantillons sur la plaque enduite, puis les avons incubés à température ambiante sur un agitateur. Nous avons ensuite éliminé les protéines en excès ou non liées à l’aide de laveuses de plaques automatisées. Pour la détection, notre équipe a ajouté des anticorps conjugués à SULFO-TAG et a enregistré le signal ECL sur un imageur MSD.
Résultat
Nous avons développé un test multiplexe de cytokines fiable et l’avons qualifié à l’échelle mésoscopique pour la détection et la quantification des chimiokines et des cytokines ; ce test constitue un outil précieux pour le dépistage des biomarqueurs de l’inflammation. Ce test de cytokines a été soigneusement validé et continue de soutenir plusieurs projets axés sur l’évaluation du statut inflammatoire.
Les mesures de biomarqueurs revêtent une importance croissante pour la compréhension de l’évolution de la maladie et le développement de traitements. Les tests de cytokines font partie intégrante de ce processus, car les cytokines sont des médiateurs clés de l’inflammation et des réactions immunitaires. La quantification des cytokines nous fournit des informations précieuses sur l’évolution de la maladie et l’efficacité thérapeutique. Cela souligne l’importance de tests de cytokines fiables pour une meilleure compréhension de diverses maladies et pour orienter le développement de traitements ciblés.
La plateforme ELISA traditionnelle est depuis longtemps reconnue pour son efficacité dans la quantification d’un seul analyte. La nouvelle plateforme MSD représente toutefois une avancée considérable dans le domaine des dosages de cytokines. Grâce à la possibilité d’analyser simultanément plusieurs biomarqueurs, la plateforme MSD révolutionne les tests de quantification des cytokines. Cette technologie innovante offre une exactitude et une précision inégalées, même avec des matrices biologiques complexes. En tirant parti des performances de la plateforme MSD, les chercheurs peuvent réaliser une quantification complète des cytokines avec des volumes d’échantillons minimaux. Cette possibilité améliore l’efficacité des analyses de quantification des cytokines et ouvre de nouvelles voies pour la compréhension des réactions immunitaires et des processus inflammatoires.
Enregistré et contrôlé par différentes autorités de régulation
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