Le sang humain ou animal est déposé sur des cartes filtrantes préparées à cet effet ; celles-ci sont ensuite séchées à l’air libre, conservées dans des sachets hermétiques, puis expédiées dans des conditions d’humidité et de température contrôlées pour l’analyse des échantillons de sang séché. Pour l’analyse bioanalytique, nous découpons de minuscules disques dans les échantillons de sang séché et les analysons à l’aide d’une méthode LC-MS/MS validée. Traditionnellement, les scientifiques ont recours au prélèvement DBS pour les études précliniques, le dépistage néonatal, ainsi que pour le prélèvement d’échantillons DBS dans des contextes où les ressources sont limitées.
Récemment, cependant, diverses applications innovantes du prélèvement DBS ont commencé à voir le jour. Ces applications comprennent les enquêtes épidémiologiques (par exemple, la surveillance du VIH), la surveillance thérapeutique des médicaments (TDM), ainsi que la toxicologie. Les tests DBS peuvent s’avérer utiles à différentes étapes, des scénarios de recherche les plus simples aux cas cliniques très complexes, grâce à leur simplicité et à leur flexibilité.
Avantages
Les principaux avantages du test DBS comprennent un volume d’échantillon réduit et une manipulation plus aisée lors du stockage et du transport des échantillons DBS. D’autres avantages, apparemment moins évidents, de l’analyse DBS sont énumérés ci-dessous.
- Non cliniques : moins d’animaux, volume d’échantillon réduit, prélèvement moins invasif et meilleure qualité des données issues de prélèvements DBS en série par rapport aux échantillons composites
- Clinique : préférence des volontaires et du personnel clinique pour le prélèvement DBS par rapport à la canule veineuse
- Bioanalytique : préparation minimale, meilleure stabilité des composés à l'état sec et classification « non dangereux » après traitement des cartes DBS
- Traitement et expédition : équipement de prélèvement et de transport DBS plus simple
Étude
Nous avons mené cette étude sur un médicament antirétroviral, utilisé en association avec d’autres traitements contre le VIH. En raison de l’indisponibilité de congélateurs, il est généralement difficile de prélever, de stocker et de conserver correctement des échantillons sanguins de haute intégrité dans les zones reculées. Le coût élevé de l’expédition des échantillons depuis ces sites de prélèvement DBS isolés vers des laboratoires d’analyse éloignés constituait un fardeau. Les chercheurs ont donc décidé d’utiliser la technique de prélèvement DBS. Ils ont prélevé chaque échantillon DBS à six endroits différents afin de garantir une analyse précise et redondante.
Notre équipe a traité les échantillons DBS, les a analysés à l’aide d’une méthode LC-MS/MS mise au point dans notre laboratoire, puis a consigné les résultats des tests DBS. Nous avons analysé et comparé les résultats de chaque échantillon en cinq réplicats. Le coefficient de variation (CV) observé parmi ces échantillons DBS était inférieur à 7,2 %, ce qui démontre la robustesse et la reproductibilité de la méthode bioanalytique, ainsi que la précision du processus de prélèvement DBS.
Conclusion
De manière générale, les composés testés par analyse DBS se sont révélés prometteurs. Nous recommandons toutefois vivement de mener une analyse de validation et de faisabilité avant de publier les résultats. Conformément aux recommandations de la FDA, cette validation doit porter sur la température de stockage et de manipulation, l’homogénéité du dépôt des échantillons DBS, l’hématocrite, la stabilité, le transfert et la reproductibilité, y compris l’ISR[4]. De plus, la concordance entre l’analyse des échantillons de sang séché et les dosages plasmatiques traditionnels doit être établie dans la mesure du possible[5]. Le point le plus crucial est de s’assurer que le test sur échantillons de sang séché respecte les directives strictes de contrôle qualité (CQ) en matière d’exactitude, de fiabilité et de cohérence des données avant de se fier à ses résultats pour mener des études pharmacocinétiques (PK) et bioanalytiques.
NorthEast BioLab propose les services suivants pour les échantillons DBS.
- Développement, validation et analyse de méthodes cliniques par LC-MS/MS
- Assistance en bioanalyse LC-MS/MS non clinique
- Développement, validation et analyse de méthodes toxicologiques conformes aux BPL
- Hannon WH, Therell BL. Aperçu de l'histoire et des applications des échantillons de taches de sang séché. Dans : Li W, Lee MS, éditeurs. Taches de sang séché. Applications et techniques. Vol. 3. Hoboken : Wiley ; 2014. pp. 3–15.
- Grüner N, Stambouli O, Ross RS. Taches de sang séché : préparation et traitement en vue de leur utilisation dans les immunoessais et les techniques moléculaires. J Vis Exp. 13 mars 2015 ; (97). doi : 10.3791/52619.
- Stove CP1, Ingels AS, De Kesel PM, Lambert WE. Les taches de sang séché en toxicologie : du berceau à la tombe ? Crit Rev Toxicol. mars 2012 ; 42(3) : 230-43. doi : 10.3109/10408444.2011.650790.
- Agence américaine des produits alimentaires et médicamenteux (FDA), Lignes directrices à l'intention de l'industrie –
Validation des méthodes bioanalytiques, septembre 2013 Biopharmaceutics Révision 1 - Neogi U, Gupta S, Rodridges R, Sahoo PN, Rao SD, Rewari BB, Shastri S, Costa AD, Shet A., Quantification de l’ARN du VIH-1 à partir de taches de sang séché : un outil utile pour la surveillance de la charge virale chez les personnes infectées par le VIH en Inde, Indian J Med Res. Décembre 2012 ; 136(6) : 956-62
Enregistré et contrôlé par diverses agences de réglementation
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