Het kwantificeren van aminozuren in menselijk plasma is afhankelijk van selectieve, betrouwbare en nauwkeurige bioanalytische methoden en biomoleculaire testen, zoals LC-MS-aminozuuranalyse. Aminozuren komen in variërende concentraties voor in complexe biologische matrices en hebben een sterke polariteit en een laag molecuulgewicht.
Bioanalytici maken gebruik van verschillende methoden voor aminozuuranalyse, zoals fluorescentie, ultraviolet, elektrochemische en massaspectrometrie, voor het bepalen van aminozuren, en capillaire elektroforese of HPLC voor de scheiding. Ultraviolet- en fluorescentietechnieken vereisen doorgaans een derivatisatiestap, wat de detectiegevoeligheid en scheidingsmogelijkheden verbetert. De monstervoorbereiding is echter een moeizaam proces en vergt een langere analysetijd.
Naast het in evenwicht brengen van meerdere analyten moesten we ook het lage molecuulgewicht ervan aanpakken. Een andere grote uitdaging waar onze wetenschappers mee te maken hadden, waren de hoge endogene concentraties van deze aminozuren in de biologische matrix. Ons team kreeg de opdracht om deze aminozuren in variërende concentraties en met sterke polariteit te kwantificeren met behulp van selectieve, betrouwbare en nauwkeurige bioanalytische methoden voor aminozuuranalyse.
Recente technologische ontwikkelingen hebben de detectie van niet-gederivatiseerde aminozuren via tandem-massaspectrometrie mogelijk gemaakt. Tandem-massaspectrometrie voor aminozuren biedt een hoge gevoeligheid en selectiviteit en kent een eenvoudiger protocol voor monstervoorbereiding. Dat gezegd hebbende, blijft het kwantificeren van niet-gederivatiseerde aminozuren bij analyse met UHPLC een uitdaging, gezien de variabele effecten van biologische matrices en slechte retentietijden.
Oplossing
Onze ervaren wetenschappers kozen ervoor om de technologisch geavanceerde detectie van niet-gederivatiseerde aminozuren via tandem-massaspectrometrie toe te passen in plaats van de traditionele benaderingen met fluorescentie, ultraviolet, elektrochemie en massaspectrometrie.
We hebben alle monsters voor de aminozuurbepaling voorbereid volgens de FDA-richtlijnen. Onze innovatieve aanpak en het naleven van gevestigde protocollen garanderen nauwkeurige aminozuuranalysemethoden voor uitgebreide inzichten in biologische processen en diagnostische toepassingen. Hieronder volgen de stappen die ons team heeft gevolgd voor de kwantitatieve aminozuuranalyse:
- Twee afzonderlijke LC-MS-aminozuuranalysemethoden ontwikkeld om respectievelijk 17 en 5 (van de 21) aminozuren in menselijk plasma te analyseren
- We hebben deze aminozuren gescheiden via omgekeerde-fase vloeistofchromatografie, wat pieksymmetrie en een betere retentie voor alle analyten opleverde
- We hebben minimale matrixeffecten en een hoge nauwkeurigheid gewaarborgd door gebruik te maken van een cocktail van stabiel gelabelde interne standaard en een canonieke aminozuurmix voor alle relevante analyten
- We hebben een GLP-conforme LC-MS/MS-methodevalidatie uitgevoerd om deze aminozuren in een klein volume (75 µL) menselijk plasma te kwantificeren
- De aminozuren werden gedetecteerd met behulp van in-source fragmentatie en tandem-massaspectrometrie (LC-MS/MS) voor aminozuren
- Er werd een aanvaardbare intra-run- en inter-run-nauwkeurigheid en -precisie bereikt bij vijf verschillende concentratieniveaus voor kwaliteitscontroles
- De gegevensverzameling werd uitgevoerd met Scienx’s Analyst v1.7 en de gegevensverwerking met Watson LIMS™ v7.6
Resultaat
NorthEast BioLab heeft met succes een robuuste en overdraagbare LC-MS/MS-methode ontwikkeld en gevalideerd voor kwantitatieve aminozuuranalyse van 21 aminozuren in biologische matrices. We kunnen de resultaten van onze LC-MS-aminozuuranalysemethoden via de HPLC-methode toepassen in talrijke onderzoeken waarbij aminozuurkwantificering als biomarker vereist is. Dit kan onze opdrachtgevers helpen bij het verkennen van nieuwe behandelingspaden en therapieën waarbij aminozuren een rol spelen. NorthEast BioLab garandeert betrouwbare en uitgebreide aminozuuranalysemethoden die innovatie stimuleren en bijdragen aan wetenschappelijke vooruitgang.
Enkele opvallende kenmerken van onze gecombineerde LC-MS-aminozuuranalysemethode voor 21 aminozuren zijn onder meer:
- Kritische evaluatie van diverse parameters, waaronder het kalibratiebereik, nauwkeurigheid en precisie, overdracht van analyten, integriteit van de verdunning, matrixeffect en terugvinding van analyten
- De respons van de analyt bij de QC_LLQ was ≥ 5 keer de respons van de analyt van de nulkalibratoren, wat wijst op een grotere gevoeligheid van de LC-MS/MS-methode
- Het bereik van de intra-run en inter-run nauwkeurigheid en precisie (%CV) voor QC_Low, QC_Mid en QC_High voldeed aan de batchacceptatiecriteria, wat aangeeft dat LC-MS-aminozuuranalyse betrouwbare, nauwkeurige en reproduceerbare resultaten oplevert voor de doeleminozuren
- De ontwikkeling van een reproduceerbare, op LC-MS/MS gebaseerde bioanalytische methode voor de gelijktijdige kwantificering van L-asparaginezuur, glycine, DL-alanine, L-asparagine, L-tryptofaan, L-fenylalanine, DL-arginine, L-isoleucine, DL-leucine, L-(+)-lysine, L-proline, DL-serine, DL-tyrosine, L-valine, trans-4-hydroxy-L-proline, DL-5-hydroxy-DL-lysine, L-histidine in menselijk plasma
Onze huidige aminozuuranalysediensten, waarbij gebruik wordt gemaakt van massaspectrometrie voor aminozuren, leveren op veilige wijze betrouwbare, nauwkeurige en reproduceerbare resultaten op voor de door u geselecteerde aminozuren. De intern gelabelde standaarden helpen de matrixeffecten te verminderen, wat een nauwkeurige kwantitatieve aminozuuranalyse van deze cruciale analyten in biologische matrices ondersteunt.
De ontwikkeling en validatie van onze LC-MS-methode voor aminozuuranalyse, waarmee 21 aminozuren in menselijk plasma worden gekwantificeerd, garandeert nauwkeurige en betrouwbare resultaten. Kwantitatieve aminozuuranalyse is cruciaal voor het begrijpen van biologische processen en het diagnosticeren van aandoeningen. Onze aminozuuranalysemethoden maken gebruik van de modernste instrumentatie om een hoge nauwkeurigheid en gevoeligheid te bereiken. Vertrouw op onze expertise op het gebied van kwantitatieve aminozuuranalyse om uw onderzoek en klinische studies effectief te ondersteunen.
Geregistreerd en gecontroleerd door diverse regelgevende instanties
Neem contact op met onze wetenschapper over uw LC-MS-aminozuuranalysemethoden en kwantitatieve aminozuuranalyse
Gerelateerde artikelen
MSD-hybridisatie, ELISA, PK-immunoassayontwikkeling, GLP-validatie en oligonucleotideanalyse
TaqMan-genexpressietest, ontwikkeling van een test voor variatie in het aantal kopieën, nGLP-validatie en monsteranalyse
Analyse van genomische variatie – TaqMan-analyse van enkelvoudige nucleotidepolymorfismen (SNP's)
LC-MS-bioanalyse van antisense-oligonucleotiden (ASO) met behulp van massaspectrometrie en ionenpaarchromatografie
LC-MS-analyse van epigallocatechinegallaat (EGCG) in VcEDTA-menselijk serum
LC-MS-methode voor het bepalen van het aminozuur proline en hydroxyproline in muizenweefsels
LC-MS-methode voor de analyse van DNA-adducten in celgebaseerde in-vitro-monsters
LC-MS-methode voor medicijnafgiftesystemen met everolimus-afgevende coronaire stents
Ontwikkeling van een LC-MS-methode en GLP-validatie voor de analyse van PK-plasmamonsters
Test voor heranalyse van verzamelde monsters (ISR), FDA-vereisten en evaluatie van het onderzoek
Bemonstering van gedroogde bloedvlekken (DBS), verzameling van DBS en analyse van DBS
Uw partner op het gebied van kwaliteit, veiligheid en naleving
De life sciences-sector vereist gespecialiseerde kennis en betrouwbare ondersteuning. Met onze brede expertise helpen we organisaties om te voldoen aan wet- en regelgeving, kwaliteit te waarborgen en met vertrouwen te blijven innoveren.