We hebben deze multiplex-cytokineanalyse of cytokine-test en de kwalificatie van de immunoassay voor geschiktheid voor het beoogde doel uitgevoerd met behulp van Meso Scale Discovery om acht (8) ontstekingsbiomarkers gelijktijdig te kwantificeren: multiplex IL-1 beta/IL-1F2, IL-2, IL-6, IL-8/CXCL8, IL-10, IFN-alfa-2a, IFN-gamma en TNF-alfa in menselijk plasma.
Elke stap van deze MSD ECL-multiplex-test voor cytokinekwantificering moet worden geoptimaliseerd om de reproduceerbaarheid en robuustheid te verbeteren.
Oplossing
Een van onze opdrachtgevers wilde de ontstekingsstatus van de proefpersonen in een klinisch onderzoek vaststellen na toediening van hun geneesmiddel. Hiervoor hebben we een op Meso Scale Discovery gebaseerd acht (8) plex pro-inflammatoir V-PLEX-cytokine-/chemokinepanel aanbevolen.
Deze op het MSD-platform gebaseerde cytokine-test maakt gebruik van antilichaamcocktails voor de acht analyten in een 96-wells-plaatopstelling om een reproduceerbare test te produceren met een hoge gevoeligheid en specificiteit voor deze biomarkers. Dankzij de multiplexmogelijkheden voor ontstekingsbiomarkers van het Meso Scale Discovery-platform kunnen meerdere cytokines tegelijkertijd uit één enkel monster worden gekwantificeerd, wat uitgebreide inzichten biedt in immuunreacties en de ontstekingsstatus. Deze aanpak is cruciaal bij cytokinekwantificatietests, waarbij het beoordelen van verschillende ontstekingsmarkers een holistisch inzicht biedt in de dynamiek van het immuunsysteem en de effectiviteit van de behandeling.
Het Meso Scale Discovery-platform biedt bioanalyse met verbeterde gevoeligheid, beperkte matrixeffecten en een breder dynamisch bereik, waardoor meerdere analyten uit één enkel monster kunnen worden gemeten (d.w.z. multiplexing). Deze mogelijkheid is met name waardevol bij cytokine-assays. Bovendien biedt het MSD ECL-platform stabiliteit en is het niet-radioactief dankzij eenvoudig te conjugeren labels. Deze voordelen maken MSD tot een solide alternatief voor conventionele colorimetrische methoden zoals ELISA voor de kwantificering van cytokines.
Hier hebben we de MSD multi-array cytokine-testplaat gedurende één uur bij kamertemperatuur (RT) gecoat met een cocktail van capture-antilichamen, waardoor de detectie van multiplexen van ontstekingsbiomarkers mogelijk werd. Vervolgens hebben we standaardcurves, kwaliteitscontroles en monsters voorbereid volgens de regelgevende vereisten van de FDA voor de validatie van bioanalytische methoden en monsteranalyse. Vervolgens werden 1% BSA-blokkering, standaarden, kwaliteitscontroles en monsters aan de gecoate plaat toegevoegd en bij kamertemperatuur op een schudder geïncubeerd. Daarna hebben we de overtollige of ongebonden eiwitten weggewassen in geautomatiseerde plaatwassers. Voor de detectie heeft ons team SULFO-TAG-geconjugeerd antilichaam toegevoegd en het ECL-signaal vastgelegd op een MSD-imager.
Resultaat
We hebben een betrouwbare multiplex-cytokine-test ontwikkeld en gekwalificeerd op mesoschaal voor de detectie en kwantificering van chemokines en cytokines, die dient als een waardevolle multiplex voor ontstekingsbiomarkers. Deze cytokine-test is zorgvuldig gevalideerd en blijft meerdere projecten ondersteunen die zich richten op het beoordelen van de ontstekingsstatus.
Biomarker-metingen worden steeds belangrijker voor het begrijpen van ziekteprogressie en de ontwikkeling van therapieën. Cytokine-tests zijn een integraal onderdeel van dit proces, aangezien cytokines belangrijke mediatoren zijn van ontstekingen en immuunreacties. De kwantificering van cytokines biedt ons waardevolle inzichten in het ziekteverloop en de therapeutische werkzaamheid. Dit onderstreept het belang van robuuste cytokine-tests voor het vergroten van ons inzicht in diverse ziekten en het sturen van de ontwikkeling van gerichte therapieën.
Het traditionele ELISA-platform wordt al lang gewaardeerd om zijn effectiviteit bij de kwantificering van één analyt. Het opkomende MSD-platform betekent echter een aanzienlijke vooruitgang op het gebied van cytokine-assays. Dankzij de mogelijkheid om meerdere biomarkers tegelijkertijd te analyseren, zorgt het MSD-platform voor een revolutie in cytokine-kwantificatietests. Deze innovatieve technologie biedt een ongeëvenaarde nauwkeurigheid en precisie, zelfs bij complexe biologische matrices. Door gebruik te maken van de kracht van het MSD-platform kunnen onderzoekers een uitgebreide kwantificering van cytokines realiseren met minimale monstervolumes. Deze mogelijkheid verhoogt de efficiëntie van onderzoeken naar cytokinekwantificering en opent nieuwe wegen voor het begrijpen van immuunreacties en ontstekingsprocessen.
Geregistreerd en gecontroleerd door diverse regelgevende instanties
Praat met onze wetenschapper over uw multiplex cytokine-assay en cytokine-kwantificering op Meso Scale Discovery
Gerelateerde artikelen
TaqMan-genexpressietest, ontwikkeling van een test voor variatie in het aantal kopieën, nGLP-validatie en monsteranalyse
Analyse van genomische variatie – TaqMan-analyse van enkelvoudige nucleotidepolymorfismen (SNP's)
LC-MS-bioanalyse van antisense-oligonucleotiden (ASO) met behulp van massaspectrometrie en ionenpaarchromatografie
LC-MS-analyse van epigallocatechinegallaat (EGCG) in VcEDTA-menselijk serum
LC-MS-methode voor het bepalen van het aminozuur proline en hydroxyproline in muizenweefsels
LC-MS-methode voor de analyse van DNA-adducten in celgebaseerde in-vitro-monsters
LC-MS-methode voor medicijnafgiftesystemen met everolimus-afgevende coronaire stents
Massaspectrometrie van aminozuren, kwantitatieve LC-MS-aminozuuranalyse
Ontwikkeling van een LC-MS-methode en GLP-validatie voor de analyse van PK-plasmamonsters
Test voor heranalyse van verzamelde monsters (ISR), FDA-vereisten en evaluatie van het onderzoek
Bemonstering van gedroogde bloedvlekken (DBS), verzameling van DBS en analyse van DBS
Uw partner op het gebied van kwaliteit, veiligheid en naleving
De life sciences-sector vereist gespecialiseerde kennis en betrouwbare ondersteuning. Met onze brede expertise helpen wij organisaties om te voldoen aan wet- en regelgeving, kwaliteit te waarborgen en met vertrouwen te blijven innoveren.