Anticorps bispécifique dirigé contre l'interleukine : développement et validation de tests immunologiques de pharmacocinétique, d'ADA et de pharmacodynamique pour les essais cliniques

Le médicament avait été conçu pour se lier simultanément à deux cytokines cibles, et cette architecture à double liaison posait une série de défis bioanalytiques complexes qui ne pouvaient être résolus à l’aide des méthodes de test standard destinées à une seule cible. Chaque type de test a nécessité une stratégie de développement indépendante, adaptée aux propriétés structurelles et pharmacologiques de la molécule bispécifique.

Pour le développement du test pharmacocinétique (PK), l’exigence principale était d’atteindre une sensibilité suffisante pour déterminer avec précision les concentrations du médicament, tant dans les cohortes à faible dose que dans celles à forte dose, en un seul cycle d’analyse. La large plage de doses inhérente au programme clinique exigeait une plage de quantification dynamique étendue sans compromettre les performances au niveau de la limite inférieure de quantification (LLOQ). De plus, la matrice d’essai présentait une intolérance aux facteurs de dilution standard, un obstacle courant avec les matrices biologiques complexes, ce qui a nécessité une optimisation minutieuse des tampons afin de préserver l’intégrité du test tout en respectant les exigences réglementaires en matière de sensibilité. Atteindre la sensibilité visée dans les groupes à faible dosage, tout en préservant la précision quantitative dans les échantillons à forte concentration au sein d’une seule et même méthode validée, constituait une contrainte fondamentale de conception.

Le test ADA posait un défi spécifique et cliniquement pertinent : mettre au point un test ADA tolérant à des concentrations de médicament circulantes pouvant atteindre 300 µg/mL. Des concentrations élevées de médicament au moment du prélèvement sont fréquentes dans les essais cliniques, notamment pendant et peu après l’administration, et peuvent masquer ou supprimer les signaux d’ADA dans les tests d’immunogénicité standard utilisant des formats de pontage. Atteindre une tolérance suffisante au médicament sans compromettre la sensibilité aux ADA à faible titre – ce qui peut être cliniquement pertinent même à de faibles concentrations – a nécessité une stratégie de préparation des échantillons fondamentalement révisée, allant au-delà des approches conventionnelles basées sur la dissociation acide.

Pour les mesures de liaison à la cible dans le test pharmacodynamique, le donneur d’ordre a exigé des évaluations doubles de la liaison à la cible pour les deux cibles interleukines de la molécule bispécifique. Le développement d’un test pour les cytokines liées au médicament, permettant de quantifier la liaison à la cible en présence d’anticorps bispécifique circulant, s'est avéré particulièrement complexe, car l'encombrement stérique dû à un excès de médicament libre et les interactions hétérophiles entre les composants du test entravaient la détection du signal. Les stratégies conventionnelles de capture par anticorps ne permettaient pas d’atteindre une sensibilité et une spécificité suffisantes sans une optimisation approfondie, et tant la sélection de l’anticorps de capture que la formulation du diluant de test ont nécessité des révisions répétées afin de surmonter ces interférences induites par la matrice.