Menschliches oder tierisches Blut wird auf speziell dafür vorbereitete Filterkarten aufgetragen; diese werden anschließend an der Luft getrocknet, in luftdichten Beuteln aufbewahrt und dann unter kontrollierten Feuchtigkeits- und Temperaturbedingungen zur Analyse der getrockneten Blutproben versandt. Für die bioanalytische Untersuchung schneiden wir winzige Scheiben aus den getrockneten Blutproben aus und analysieren diese mithilfe einer validierten LC-MS/MS-Methode. Traditionell nutzen Wissenschaftler die DBS-Probenentnahme für präklinische Studien, das Neugeborenen-Screening sowie für die Entnahme von DBS-Proben in ressourcenarmen Umgebungen.
In jüngster Zeit sind jedoch verschiedene innovative Anwendungen der DBS-Probenentnahme entstanden. Dazu gehören epidemiologische Untersuchungen (z. B. HIV-Überwachung), die therapeutische Arzneimittelüberwachung (TDM) sowie die Toxikologie. Dank ihrer Einfachheit und Flexibilität können DBS-Tests in verschiedenen Phasen nützlich sein, von den einfachsten Forschungsszenarien bis hin zu sehr komplexen klinischen Fällen.
Vorteile
Zu den wichtigsten Vorteilen des DBS-Tests zählen ein geringeres Probenvolumen und eine einfachere Handhabung bei der Lagerung und dem Transport von DBS-Proben. Weitere, auf den ersten Blick weniger offensichtliche Vorteile der DBS-Analyse sind im Folgenden aufgeführt.
- Nichtklinisch: weniger Tiere, geringeres Probenvolumen, weniger invasive Probenentnahme und bessere Datenqualität bei seriellen DBS-Proben im Vergleich zu Mischproben
- Klinisch: Präferenz der Probanden und des klinischen Personals für die DBS-Probenentnahme gegenüber der Venenkanüle
- Bioanalytisch: minimaler Vorbereitungsaufwand, bessere Stabilität der Verbindungen im trockenen Zustand und Einstufung als „ungefährlich“ nach der Aufbereitung der DBS-Karten
- Verarbeitung und Versand: einfachere DBS-Entnahme- und Transportausrüstung
Studie
Wir haben diese Studie mit einem antiretroviralen Medikament durchgeführt, das in Kombination mit anderen HIV-Therapien eingesetzt wird. Aufgrund fehlender Gefrierschränke ist es in abgelegenen Gebieten in der Regel schwierig, Blutproben mit hoher Integrität ordnungsgemäß zu entnehmen, zu lagern und aufzubewahren. Die hohen Kosten für den Versand der Proben von diesen abgelegenen DBS-Entnahmestellen zu weit entfernten Analyselabors stellten eine Belastung dar. Die Forscher beschlossen daher, die DBS-Entnahmetechnik einzusetzen. Sie entnahmen jede DBS-Probe an sechs verschiedenen Orten, um eine genaue und redundante Analyse zu gewährleisten.
Unser Team hat die DBS-Proben aufbereitet, sie mithilfe einer in unserem Labor entwickelten LC-MS/MS-Methode analysiert und anschließend die Ergebnisse der DBS-Tests dokumentiert. Wir haben die Ergebnisse jeder Probe in fünf Replikaten analysiert und verglichen. Der bei diesen DBS-Proben beobachtete Variationskoeffizient (VK) lag unter 7,2 %, was die Robustheit und Reproduzierbarkeit der bioanalytischen Methode sowie die Genauigkeit des DBS-Probenahmeverfahrens belegt.
Schlussfolgerung
Im Allgemeinen erwiesen sich die mittels DBS-Analyse getesteten Verbindungen als vielversprechend. Wir empfehlen jedoch dringend, vor der Veröffentlichung der Ergebnisse eine Validierungs- und Machbarkeitsanalyse durchzuführen. Gemäß den Empfehlungen der FDA muss diese Validierung die Lager- und Handhabungstemperatur, die Homogenität der DBS-Probenabgabe, den Hämatokritwert, die Stabilität, den Transfer und die Reproduzierbarkeit, einschließlich des ISR[4], umfassen. Darüber hinaus sollte die Übereinstimmung zwischen der Analyse von getrockneten Blutproben und herkömmlichen Plasmatests so weit wie möglich nachgewiesen werden[5]. Entscheidend ist vor allem, sicherzustellen, dass der Test mit getrockneten Blutproben die strengen Richtlinien der Qualitätskontrolle (QC) hinsichtlich Genauigkeit, Zuverlässigkeit und Konsistenz der Daten erfüllt, bevor man sich auf seine Ergebnisse stützt, um pharmakokinetische (PK) und bioanalytische Studien herangezogen werden.
NorthEast BioLab bietet folgende Dienstleistungen für DBS-Proben an.
- Entwicklung, Validierung und Analyse klinischer Methoden mittels LC-MS/MS
- Unterstützung bei der nichtklinischen LC-MS/MS-Bioanalyse
- Entwicklung, Validierung und Analyse von GLP-konformen toxikologischen Methoden
- Hannon WH, Therell BL. Überblick über die Geschichte und die Anwendungen von DBS-Proben. In: Li W, Lee MS, Hrsg. Getrocknete Blutflecken. Anwendungen und Techniken. Band 3. Hoboken: Wiley; 2014. S. 3–15.
- Grüner N, Stambouli O, Ross RS. Getrocknete Blutflecken: Aufbereitung und Verarbeitung für den Einsatz in Immunoassays und molekularen Techniken. J Vis Exp. 13. März 2015; (97). doi: 10.3791/52619.
- Stove CP1, Ingels AS, De Kesel PM, Lambert WE. Getrocknete Blutflecken in der Toxikologie: von der Wiege bis zur Bahre? Crit Rev Toxicol. März 2012; 42(3): 230–43. doi: 10.3109/10408444.2011.650790.
- US-Behörde für Lebens- und Arzneimittel (FDA), Leitlinien für die Industrie –
Validierung bioanalytischer Methoden, September 2013 Biopharmaceutics Revision 1 - Neogi U, Gupta S, Rodridges R, Sahoo PN, Rao SD, Rewari BB, Shastri S, Costa AD, Shet A., Quantifizierung von HIV-1-RNA aus getrockneten Blutflecken: ein nützliches Instrument zur Überwachung der Viruslast bei HIV-Infizierten in Indien, Indian J Med Res. Dezember 2012; 136(6): 956–62
Zugelassen und geprüft durch verschiedene Aufsichtsbehörden
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