Menselijk/dierlijk bloed wordt op voorbereide filterkaarten aangebracht, waarna de kaarten aan de lucht worden gedroogd, in luchtdichte zakken worden bewaard en onder gecontroleerde vochtigheids- en temperatuuromstandigheden worden verzonden voor DBS-analyse. Voor bioanalytische analyse ponsen we kleine schijfjes uit de DBS en analyseren we deze met behulp van een gevalideerde LC-MS/MS-methode. Van oudsher maken wetenschappers gebruik van DBS-afname voor preklinische studies, screening van pasgeborenen en het verzamelen van DBS-monsters in omgevingen met beperkte middelen.
De laatste tijd zijn er echter allerlei innovatieve toepassingen voor DBS-bemonstering in opkomst. Deze DBS-testtoepassingen omvatten epidemiologische onderzoeken (bijv. HIV-monitoring), therapeutische geneesmiddelenmonitoring (TDM) en toxicologie. DBS-tests kunnen in verschillende stadia nuttig zijn, van de eenvoudigste onderzoeksscenario’s tot zeer complexe klinische gevallen, dankzij hun eenvoud en flexibiliteit.
Voordelen
De belangrijkste voordelen van de DBS-test zijn onder meer een lager benodigd monstervolume en eenvoudigere hantering tijdens de opslag en het transport van DBS-monsters. Andere, op het eerste gezicht minder voor de hand liggende voordelen van DBS-analyse worden hieronder opgesomd.
- Niet-klinisch: minder dieren, kleiner monstervolume, minder invasieve bemonstering en betere gegevenskwaliteit door seriële DBS-bemonstering in vergelijking met samengestelde monsters
- Klinisch: Vrijwilligers en klinisch personeel geven de voorkeur aan DBS-bemonstering boven een veneuze canule
- Bioanalytisch: Minimale voorbereiding, grotere stabiliteit van de droge stof en classificatie als „niet-gevaarlijk“ na behandeling van DBS-kaarten
- Verwerking en verzending: Eenvoudigere apparatuur voor DBS-afname en -transport
Onderzoek
We hebben het onderzoek uitgevoerd naar een antiretroviraal geneesmiddel dat in combinatie met andere behandelingen voor HIV wordt gebruikt. Vanwege het ontbreken van diepvriezers is het in afgelegen gebieden over het algemeen moeilijk om bloedmonsters op de juiste manier af te nemen, op te slaan en de hoge integriteit ervan te behouden. De hoge verzendkosten voor het vervoer van monsters van deze afgelegen DBS-afnamelocaties naar verafgelegen monsteranalysefaciliteiten vormden een zware last. Daarom besloten de onderzoekers de DBS-afnametechniek te gebruiken. Ze verzamelden elk DBS-monster op zes locaties voor een nauwkeurige en redundante DBS-analyse.
Ons team verwerkte de DBS-monsters, analyseerde ze met behulp van een in ons laboratorium ontwikkelde LC-MS/MS-methode en documenteerde de DBS-testresultaten. We hebben de resultaten van elk monster in vijf herhalingen geanalyseerd en vergeleken. De waargenomen variatiecoëfficiënt (CV) tussen deze DBS-monsters bedroeg minder dan 7,2%, wat aangeeft dat de bioanalytische methode robuust en reproduceerbaar is en dat het DBS-afnameproces nauwkeurig is.
Conclusie
Over het algemeen zijn de met de DBS-test geteste verbindingen veelbelovend gebleken. Wij raden echter ten zeerste aan om een validatie- en haalbaarheidsanalyse uit te voeren alvorens resultaten te rapporteren. Volgens de richtlijnen van de FDA moet deze validatie betrekking hebben op de opslag- en verwerkingstemperatuur, de homogeniteit van de DBS-monsterafgifte, het hematocriet, de stabiliteit, de overdracht en de reproduceerbaarheid, inclusief ISR[4]. Bovendien moet, indien mogelijk, de overeenstemming tussen de DBS-analyse en traditionele plasma-assays worden vastgesteld[5]. Het belangrijkste punt is ervoor te zorgen dat de DBS-test voldoet aan de strenge richtlijnen voor kwaliteitscontrole (QC) met betrekking tot de nauwkeurigheid, betrouwbaarheid en consistentie van de gegevens, voordat er op de resultaten ervan wordt vertrouwd bij het uitvoeren van farmacokinetische (PK) en bioanalytische studies.
NorthEast BioLab biedt de volgende diensten voor DBS-monsters aan.
- Ontwikkeling, validatie en analyse van klinische LC-MS/MS-methoden
- Ondersteuning bij niet-klinische bioanalytische LC-MS/MS-onderzoeken
- GLP-toxicologische methodeontwikkeling, validatie en analyse
- Hannon WH, Therell BL. Overzicht van de geschiedenis en toepassingen van gedroogde bloedvlekmonsters. In: Li W, Lee MS, red. Gedroogde bloedvlekken. Toepassingen en technieken. Deel 3. Hoboken: Wiley; 2014. pp. 3–15.
- Grüner N, Stambouli O, Ross RS. Gedroogde bloedvlekken – voorbereiding en verwerking voor gebruik in immunoassays en moleculaire technieken. J Vis Exp. 13 maart 2015;(97). doi: 10.3791/52619.
- Stove CP1, Ingels AS, De Kesel PM, Lambert WE. Gedroogde bloedvlekken in de toxicologie: van de wieg tot het graf? Crit Rev Toxicol. maart 2012;42(3):230-43. doi: 10.3109/10408444.2011.650790.
- Amerikaanse Food and Drug Administration, Richtlijnen voor de industrie –
Validatie van bioanalytische methoden, september 2013 Biopharmaceutics Revisie 1 - Neogi U, Gupta S, Rodridges R, Sahoo PN, Rao SD, Rewari BB, Shastri S, Costa AD, Shet A., Kwantificering van HIV-1-RNA in gedroogde bloedvlekken: een nuttig hulpmiddel voor het monitoren van de virale belasting bij met HIV geïnfecteerde personen in India, Indian J Med Res. december 2012;136(6):956-62
Geregistreerd en gecontroleerd door diverse regelgevende instanties
Neem contact op met onze wetenschapper over uw bemonstering, afname en analyse van gedroogde bloedvlekken (DBS)
Gerelateerde artikelen
MSD-hybridisatie, ELISA, PK-immunoassayontwikkeling, GLP-validatie en oligonucleotideanalyse
TaqMan-genexpressietest, ontwikkeling van een test voor variatie in het aantal kopieën, nGLP-validatie en monsteranalyse
Analyse van genomische variatie – TaqMan-analyse van enkelvoudige nucleotidepolymorfismen (SNP's)
LC-MS-bioanalyse van antisense-oligonucleotiden (ASO) met behulp van massaspectrometrie en ionenpaarchromatografie
LC-MS-analyse van epigallocatechinegallaat (EGCG) in VcEDTA-menselijk serum
LC-MS-methode voor het bepalen van het aminozuur proline en hydroxyproline in muizenweefsels
LC-MS-methode voor de analyse van DNA-adducten in celgebaseerde in-vitro-monsters
LC-MS-methode voor medicijnafgiftesystemen met everolimus-afgevende coronaire stents
Massaspectrometrie van aminozuren, kwantitatieve LC-MS-aminozuuranalyse
Ontwikkeling van een LC-MS-methode en GLP-validatie voor de analyse van PK-plasmamonsters
Test voor heranalyse van verzamelde monsters (ISR), FDA-vereisten en evaluatie van het onderzoek
Uw partner op het gebied van kwaliteit, veiligheid en naleving
De life sciences-sector vereist gespecialiseerde kennis en betrouwbare ondersteuning. Met onze brede expertise helpen wij organisaties om te voldoen aan wet- en regelgeving, kwaliteit te waarborgen en met vertrouwen te blijven innoveren.