Het onderzoek richtte zich op het evalueren van de effectiviteit van medicijnafgiftesystemen, met name everolimus-afgevende stents, bij het nauwkeurig afleveren van everolimus op de beoogde plaats, waarbij het belang van een everolimus-test bij het beoordelen van de medicijndistributie en -accumulatie werd benadrukt. Aangezien dit geneesmiddel een smalle therapeutische marge heeft en bij orale toediening vaak toxiciteit vertoont, is het essentieel om de concentratie, distributie en accumulatie ervan in het lichaam te monitoren om de veiligheid en werkzaamheid van de everolimus-stent voor precisiegerichte medicijnafgifte te waarborgen. Een bijkomende uitdaging wordt gevormd door de goed gedocumenteerde neiging van everolimus om zich op te hopen in erytrocyten, waardoor analyse van volbloed representatiever is dan de standaardplasma-matrixanalyse bij everolimus-testen.
Het onderzoek werd uitgevoerd in een varkensmodel en omvatte de analyse van everolimusconcentraties in 9 verschillende complexe matrices (8 weefseltypen en volbloed). De everolimustest richtte zich op een lager concentratiebereik dan doorgaans wordt waargenomen voor deze verbinding, waardoor voor sommige matrices minimale monstergroottes nodig waren. Dergelijke op maat gemaakte systemen voor medicijnafgifte, zoals de everolimus-afgevende coronaire stent, zijn bedoeld om de therapeutische resultaten te verbeteren en tegelijkertijd de systemische toxiciteit te minimaliseren, wat het belang onderstreept van nauwkeurige bioanalytische methoden, waaronder everolimus-testen, bij het beoordelen van de werkzaamheid.
Oplossing
Om de uitdagingen van de Everolimus-test in varkensvolbloed en weefselhomogenaten/extracten het hoofd te bieden, hebben onze wetenschappers een bioanalytische LC-MS/MS-methode ontwikkeld en gevalideerd die eenvoudig, gevoelig en specifiek is. Deze everolimus-test is cruciaal voor het beoordelen van de afgifte en werkzaamheid van geneesmiddelen in toedieningssystemen of -apparaten. Deze methode is speciaal afgestemd op het evalueren van everolimus-afgevende coronaire stents, ook wel everolimus-afgevende stents of everolimus-stents genoemd.
De aanwezigheid van hele cellen in de matrix werd aangepakt door middel van de eiwitprecipitatie-extractiemethode, waarbij gebruik werd gemaakt van een combinatie van een cellysisbuffer en een organisch oplosmiddel, waardoor een nauwkeurige beoordeling van de kinetiek van de geneesmiddelafgifte bij everolimus-testen werd gewaarborgd. We hebben de nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid verbeterd in de aanwezigheid van complexe matrices die relevant zijn voor geneesmiddelafgiftesystemen door gebruik te maken van een gedeuteriseerde interne standaard in de Everolimus-test. Dit minimaliseerde de variabiliteit van het matrixeffect tussen de analyt en de interne standaard, waardoor de precisie van de metingen bij de Everolimus-testen werd gewaarborgd.
Er werd een verbeterde gevoeligheid bereikt met omgekeerde-fase LC-MS met behulp van elektrospray-ionisatie (ESI) in de positieve-ionenmodus op een Sciex 6500-massaspectrometer. Dit maakte een nauwkeurige evaluatie van de afgifte-effectiviteit van het geneesmiddel in de Everolimus-test mogelijk. De optimale massaparing voor everolimus volgde het ammoniumadduct van de moedermassa, en de mobiele fase-oplossingen voor de LC werden verder aangepast wat betreft het ammoniumgehalte om de gevoeligheid te maximaliseren, met name met het oog op systemen voor medicijnafgifte. Volgens de FDA-richtlijnen werd de testmethode voor everolimus aanvankelijk gevalideerd binnen een concentratiebereik van 0,1-20 ng/mL voor gevoeligheid, nauwkeurigheid, precisie, extractieopbrengst, matrixeffect en stabiliteit in varkensvolbloed, wat waardevolle inzichten opleverde in de dynamiek van de medicijnafgifte. Er werden ook weefselhomogenaten bereid in een bufferoplossing, waarna verdere experimenten werden uitgevoerd om de testmethode voor everolimus te valideren voor een concentratiebereik van 0,5–100 ng/mL in elk weefseltype.
Resultaat
Deze LC-MS/MS-methode, specifiek afgestemd op de bepaling van everolimus, werd toegepast in meerdere bioanalytische studies om varkensvolbloed en -weefsels met een everolimus-afgevende coronaire stent te kwantificeren, waarbij de nadruk vooral lag op systemen voor geneesmiddelafgifte. De resultaten toonden hoge concentraties everolimus aan, gelokaliseerd in de slagaders waar de everolimus-afgevende stent was geplaatst. Dit duidde op een effectieve medicijnafgifte op de doelplaats. Er was sprake van enige extra geneesmiddelaccumulatie in longweefsel, met veel lagere concentraties in alle andere weefselmatrices. Deze resultaten geven aan dat het medische hulpmiddel sirolimus effectief aflevert op de doelplaats en tonen bovendien de betrouwbaarheid en toepasbaarheid aan van de LC-MS/MS-methode voor het beoordelen van de geneesmiddelverdeling in systemen voor geneesmiddelafgifte.
Wij beschikken over de nodige middelen om everolimus-tests uit te voeren in een breed scala aan onderzoeken en complexe matrices, inclusief de analyse van weefselmonsters aan het einde van het onderzoek, wat van cruciaal belang kan zijn voor het bevestigen van de geneesmiddelverdeling en -accumulatie in systemen voor geneesmiddelafgifte. Onze expertise op het gebied van LC-MS/MS en monstervoorbereiding ondersteunt betrouwbare en efficiënte methodeontwikkeling voor diverse geneesmiddelen, toedieningswijzen en monstertypes. Deze capaciteit garandeert nauwkeurige en flexibele testoplossingen voor everolimus, afgestemd op de specifieke vereisten van elk onderzoek, met name bij onderzoeken waarbij toedieningssystemen zoals everolimus-stents betrokken zijn.
Geregistreerd en geïnspecteerd door diverse regelgevende instanties
Neem contact op met onze wetenschapper over uw LC-MS-testen voor everolimus-afgevende coronaire stents
Gerelateerde artikelen
MSD-hybridisatie, ELISA, PK-immunoassayontwikkeling, GLP-validatie en oligonucleotideanalyse
TaqMan-genexpressietest, ontwikkeling van een test voor variatie in het aantal kopieën, nGLP-validatie en monsteranalyse
Analyse van genomische variatie – TaqMan-analyse van enkelvoudige nucleotidepolymorfismen (SNP's)
LC-MS-bioanalyse van antisense-oligonucleotiden (ASO) met behulp van massaspectrometrie en ionenpaarchromatografie
LC-MS-analyse van epigallocatechinegallaat (EGCG) in VcEDTA-menselijk serum
LC-MS-methode voor het bepalen van het aminozuur proline en hydroxyproline in muizenweefsels
LC-MS-methode voor de analyse van DNA-adducten in celgebaseerde in-vitro-monsters
Massaspectrometrie van aminozuren, kwantitatieve LC-MS-aminozuuranalyse
Ontwikkeling van een LC-MS-methode en GLP-validatie voor de analyse van PK-plasmamonsters
Test voor heranalyse van verzamelde monsters (ISR), FDA-vereisten en evaluatie van het onderzoek
Bemonstering van gedroogde bloedvlekken (DBS), verzameling van DBS en analyse van DBS
Uw partner op het gebied van kwaliteit, veiligheid en naleving
De life sciences-sector vereist gespecialiseerde kennis en betrouwbare ondersteuning. Met onze brede expertise helpen wij organisaties om te voldoen aan wet- en regelgeving, kwaliteit te waarborgen en met vertrouwen te blijven innoveren.