We hebben de ontwikkeling van een oligonucleotide-analysemethode en de GLP-validatie voltooid om het aptameer van de opdrachtgever in ratten-, konijnen- en menselijk plasma en menselijke urine te kwantificeren door middel van oligonucleotide-hybridisatieanalyse.
Deze oligonucleotide-analyse omvatte een sandwich-hybridisatie-ELISA met een complementair oligonucleotide voor de opvang en een biotine-gelabeld complementair oligonucleotide voor de detectie, gevolgd door toevoeging van streptavidine SULFO-TAG en detectie van de elektrochemiluminescente (ECL) reactie op het Meso Scale Discovery (MSD)-platform voor de kwantificering van oligonucleotiden.
Oplossing
Een van onze opdrachtgevers had behoefte aan een reproduceerbare PK-oligonucleotide-test met hoge gevoeligheid voor hun oligonucleotide-geneesmiddel. Hiervoor hebben we een op Meso Scale Discovery gebaseerde test uitgevoerd in combinatie met oligonucleotide-hybridisatieanalyse.
Ons ervaren team heeft elke stap van deze ECL-methode voor oligonucleotidehybridisatie geoptimaliseerd om de prestaties en robuustheid van de oligonucleotide-test te verbeteren.
Om te beginnen maakte ons team gebruik van een ‘checkerboard’-aanpak om de optimale concentraties te bepalen voor de coating- en detectie-oligonucleotiden, de blokkeringscondities, de temperatuur voor oligonucleotide-denaturatie, -annealing en -hybridisatie, en de incubatieduur. We hebben ook de juiste monsterverdunning bepaald, aangezien deze analyt bij hogere concentraties een ‘hook-effect’ vertoonde.
De MSD multi-array-oligonucleotide-analyseplaat werd 's nachts gecoat met het capture-oligonucleotide. Standaarden en monsters werden bereid, door verhitting geïnactiveerd en gecombineerd met het biotine-gelabelde detectie-oligonucleotide. Vervolgens werd dit mengsel in een thermocycler geannealed en geïncubeerd in de gecoate plaat om de oligonucleotide-hybridisatieanalyse mogelijk te maken. Daarna hebben we de ongebonden oligonucleotiden weggewassen en het ECL-signaal van het gehybridiseerde oligonucleotide met streptavidine-SULFO-TAG gedetecteerd op een MSD-imager voor de kwantificering van de oligonucleotiden.
Resultaat
We hebben een betrouwbare en overdraagbare oligonucleotide-testmethode ontwikkeld voor de bioanalyse van RNA-aptameren in meerdere biologische matrices. Bovendien vertoonden deze PK-testen een dosisafhankelijk profiel en werden ze door de sponsor ingediend bij de regelgevende instanties voor de kwantificering van oligonucleotiden.
Aangezien oligonucleotide-aptameren een hoge therapeutische en diagnostische waarde blijken te hebben en bijzonder nuttig zijn voor de celtype-specifieke toediening van andere RNA-therapeutica (zoals siRNA), is er een grotere impuls ontstaan voor de ontwikkeling van nieuwe aptameren als therapeutica.
Bijgevolg kan een robuuste en reproduceerbare oligonucleotideanalyse voor PK- en TK-onderzoeken enorm helpen bij het versnellen van de geneesmiddelenontwikkeling voor deze nieuwe therapeutica.
Geregistreerd en geïnspecteerd door diverse regelgevende instanties
Neem contact op met onze wetenschapper over uw MSD-hybridisatie-ELISA, oligonucleotide-analyse of oligonucleotide-test
Gerelateerde artikelen
TaqMan-genexpressietest, ontwikkeling van een test voor variatie in het aantal kopieën, nGLP-validatie en monsteranalyse
Analyse van genomische variatie – TaqMan-analyse van enkelvoudige nucleotidepolymorfismen (SNP's)
LC-MS-bioanalyse van antisense-oligonucleotiden (ASO) met behulp van massaspectrometrie en ionenpaarchromatografie
LC-MS-analyse van epigallocatechinegallaat (EGCG) in VcEDTA-menselijk serum
LC-MS-methode voor het bepalen van het aminozuur proline en hydroxyproline in muizenweefsels
LC-MS-methode voor de analyse van DNA-adducten in celgebaseerde in-vitro-monsters
LC-MS-methode voor medicijnafgiftesystemen met everolimus-afgevende coronaire stents
Massaspectrometrie van aminozuren, kwantitatieve LC-MS-aminozuuranalyse
Ontwikkeling van een LC-MS-methode en GLP-validatie voor de analyse van PK-plasmamonsters
Test voor heranalyse van verzamelde monsters (ISR), FDA-vereisten en evaluatie van het onderzoek
Bemonstering van gedroogde bloedvlekken (DBS), verzameling van DBS en analyse van DBS
Uw partner op het gebied van kwaliteit, veiligheid en naleving
De life sciences-sector vereist gespecialiseerde kennis en betrouwbare ondersteuning. Met onze brede expertise helpen wij organisaties om te voldoen aan wet- en regelgeving, kwaliteit te waarborgen en met vertrouwen te blijven innoveren.