Die Quantifizierung von Aminosäuren im menschlichen Plasma erfordert selektive, zuverlässige und genaue bioanalytische Methoden und biomolekulare Tests, wie beispielsweise die LC-MS-Aminosäureanalyse. Aminosäuren kommen in unterschiedlichen Konzentrationen in komplexen biologischen Matrizen vor und weisen eine hohe Polarität sowie ein geringes Molekulargewicht auf.
Bioanalytiker nutzen verschiedene Methoden zur Aminosäureanalyse, wie Fluoreszenz, Ultraviolett, elektrochemische Verfahren und Massenspektrometrie zur Bestimmung der Aminosäuren sowie Kapillarelektrophorese oder HPLC zur Trennung. Ultraviolett- und Fluoreszenztechniken erfordern in der Regel einen Derivatisierungsschritt, der die Nachweisempfindlichkeit und die Trennmöglichkeiten verbessert. Die Probenvorbereitung ist jedoch ein aufwendiger Prozess und erfordert eine längere Analysezeit.
Neben dem Ausgleich mehrerer Analyten mussten wir auch deren niedriges Molekulargewicht berücksichtigen. Eine weitere große Herausforderung für unsere Wissenschaftler waren die hohen endogenen Konzentrationen dieser Aminosäuren in der biologischen Matrix. Unser Team erhielt den Auftrag, diese Aminosäuren in unterschiedlichen Konzentrationen und mit starker Polarität mithilfe selektiver, zuverlässiger und präziser bioanalytischer Methoden zur Aminosäureanalyse zu quantifizieren.
Jüngste technologische Entwicklungen haben den Nachweis nicht derivatisierter Aminosäuren mittels Tandem-Massenspektrometrie ermöglicht. Die Tandem-Massenspektrometrie für Aminosäuren bietet eine hohe Empfindlichkeit und Selektivität und zeichnet sich durch ein vereinfachtes Probenvorbereitungsprotokoll aus. Dennoch bleibt die Quantifizierung nicht derivatisierter Aminosäuren bei der Analyse mittels UHPLC angesichts der variablen Auswirkungen biologischer Matrizen und schlechter Retentionszeiten eine Herausforderung.
Lösung
Unsere erfahrenen Wissenschaftler entschieden sich dafür, die technologisch fortschrittliche Detektion nicht derivatisierter Aminosäuren mittels Tandem-Massenspektrometrie anzuwenden, anstatt auf herkömmliche Ansätze wie Fluoreszenz, Ultraviolett, Elektrochemie und Massenspektrometrie zurückzugreifen.
Wir haben alle Proben für die Aminosäurebestimmung gemäß den FDA-Richtlinien aufbereitet. Unser innovativer Ansatz und die Einhaltung etablierter Protokolle gewährleisten präzise Aminosäureanalysemethoden für umfassende Einblicke in biologische Prozesse und diagnostische Anwendungen. Nachfolgend sind die Schritte aufgeführt, die unser Team für die quantitative Aminosäureanalyse durchgeführt hat:
- Entwicklung von zwei separaten LC-MS-Aminosäureanalysemethoden zur Analyse von 17 bzw. 5 (der 21) Aminosäuren in menschlichem Plasma
- Wir haben diese Aminosäuren mittels Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie getrennt, was zu Peaksymmetrie und einer besseren Retention für alle Analyten führte
- Durch die Verwendung eines Cocktails aus einem stabil markierten internen Standard und einer kanonischen Aminosäuremischung für alle relevanten Analyten haben wir minimale Matrixeffekte und eine hohe Genauigkeit gewährleistet
- Wir haben eine GLP-konforme LC-MS/MS-Methodenvalidierung durchgeführt, um diese Aminosäuren in einem kleinen Volumen (75 µL) menschlichen Plasmas zu quantifizieren
- Die Aminosäuren wurden mittels In-Source-Fragmentierung und Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) für Aminosäuren nachgewiesen
- Bei fünf verschiedenen Konzentrationsstufen für Qualitätskontrollen wurden eine akzeptable Intra-Run- und Inter-Run-Genauigkeit sowie Präzision erreicht
- Die Datenerfassung erfolgte mit Scienx’s Analyst v1.7 und die Datenverarbeitung mit Watson LIMS™ v7.6
Ergebnis
NorthEast BioLab hat erfolgreich eine robuste und übertragbare LC-MS/MS-Methode für die quantitative Aminosäureanalyse von 21 Aminosäuren in biologischen Matrizen entwickelt und validiert. Wir können die Ergebnisse unserer LC-MS-Aminosäureanalysemethoden mittels der HPLC-Methode in zahlreichen Untersuchungen anwenden, bei denen die Aminosäurequantifizierung als Biomarker erforderlich ist. Dies kann unseren Auftraggebern dabei helfen, neue Behandlungswege und Therapien zu erforschen, bei denen Aminosäuren eine Rolle spielen. NorthEast BioLab garantiert zuverlässige und umfassende Aminosäureanalysemethoden, die Innovationen fördern und zum wissenschaftlichen Fortschritt beitragen.
Zu den herausragenden Merkmalen unserer kombinierten LC-MS-Aminosäureanalysemethode für 21 Aminosäuren gehören unter anderem:
- Kritische Bewertung verschiedener Parameter, darunter Kalibrierbereich, Genauigkeit und Präzision, Analytübertragung, Verdünnungsintegrität, Matrixeffekt und Wiederfindungsrate der Analyten
- Die Signalstärke des Analyten bei QC_LLQ betrug ≥ das Fünffache der Signalstärke des Analyten der Nullkalibratoren, was auf eine höhere Empfindlichkeit der LC-MS/MS-Methode hindeutet
- Der Bereich der Intra-Run- und Inter-Run-Genauigkeit und -Präzision (%CV) für QC_Low, QC_Mid und QC_High entsprach den Chargenabnahmekriterien, was darauf hindeutet, dass die LC-MS-Aminosäureanalyse zuverlässige, genaue und reproduzierbare Ergebnisse für die Zielaminosäuren liefert
- Die Entwicklung einer reproduzierbaren, auf LC-MS/MS basierenden bioanalytischen Methode zur gleichzeitigen Quantifizierung von L-Asparaginsäure, Glycin, DL-Alanin, L-Asparagin, L-Tryptophan, L-Phenylalanin, DL-Arginin, L-Isoleucin, DL-Leucin, L-(+)-Lysin, L-Prolin, DL-Serin, DL-Tyrosin, L-Valin, trans-4-Hydroxy-L-Prolin, DL-5-Hydroxy-DL-Lysin und L-Histidin in menschlichem Plasma
Unsere aktuellen Aminosäureanalysedienstleistungen, bei denen die Aminosäure-Massenspektrometrie zum Einsatz kommt, liefern auf sichere Weise zuverlässige, genaue und reproduzierbare Ergebnisse für die von Ihnen ausgewählten Aminosäuren. Die intern markierten Standards tragen dazu bei, Matrixeffekte zu reduzieren, was eine genaue quantitative Aminosäureanalyse dieser wichtigen Analyten in biologischen Matrices unterstützt.
Die Entwicklung und Validierung unserer LC-MS-Methode zur Aminosäureanalyse, mit der 21 Aminosäuren in menschlichem Plasma quantifiziert werden, garantiert präzise und zuverlässige Ergebnisse. Die quantitative Aminosäureanalyse ist entscheidend für das Verständnis biologischer Prozesse und die Diagnose von Erkrankungen. Unsere Methoden zur Aminosäureanalyse nutzen modernste Geräte, um eine hohe Genauigkeit und Empfindlichkeit zu erreichen. Vertrauen Sie auf unsere Expertise im Bereich der quantitativen Aminosäureanalyse, um Ihre Forschung und klinischen Studien effektiv zu unterstützen.
Registriert und geprüft durch verschiedene Aufsichtsbehörden
Wenden Sie sich bezüglich Ihrer LC-MS-Aminosäureanalysemethoden und der quantitativen Aminosäureanalyse an unseren Wissenschaftler
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