Wir haben diese Multiplex-Zytokinanalyse bzw. diesen Zytokin-Test sowie die Eignungsprüfung des Immunoassays für den vorgesehenen Zweck mithilfe von Meso Scale Discovery durchgeführt, um acht (8) Entzündungsbiomarker gleichzeitig zu quantifizieren: Multiplex-IL-1-beta/IL-1F2, IL-2, IL-6, IL-8/CXCL8, IL-10, IFN-alpha-2a, IFN-gamma und TNF-alpha in menschlichem Plasma.
Jeder Schritt dieses MSD-ECL-Multiplex-Tests zur Zytokinquantifizierung muss optimiert werden, um die Reproduzierbarkeit und Robustheit zu verbessern.
Lösung
Einer unserer Kunden wollte den Entzündungsstatus der Probanden in einer klinischen Studie nach Verabreichung seines Arzneimittels bestimmen. Zu diesem Zweck haben wir ein auf Meso Scale Discovery basierendes 8-Plex-Panel für proinflammatorische V-PLEX-Zytokine und Chemokine empfohlen.
Dieser auf der MSD-Plattform basierende Zytokin-Test nutzt Antikörpercocktails für die acht Analyten in einem 96-Well-Platten-Setup, um einen reproduzierbaren Test mit hoher Sensitivität und Spezifität für diese Biomarker zu erzielen. Dank der Multiplex-Fähigkeiten der Meso Scale Discovery-Plattform für Entzündungsbiomarker können mehrere Zytokine gleichzeitig aus einer einzigen Probe quantifiziert werden, was umfassende Einblicke in Immunreaktionen und den Entzündungsstatus bietet. Dieser Ansatz ist bei Zytokin-Quantifizierungstests von entscheidender Bedeutung, da die Bewertung verschiedener Entzündungsmarker einen ganzheitlichen Einblick in die Dynamik des Immunsystems und die Wirksamkeit der Behandlung bietet.
Die Meso Scale Discovery-Plattform bietet Bioanalysen mit verbesserter Empfindlichkeit, minimierten Matrixeffekten und einem breiteren dynamischen Bereich, wodurch mehrere Analyten aus einer einzigen Probe gemessen werden können (d. h. Multiplexing). Diese Möglichkeit ist insbesondere bei Zytokin-Assays von großem Wert. Darüber hinaus bietet die MSD-ECL-Plattform Stabilität und ist dank einfach zu konjugierender Marker nicht radioaktiv. Diese Vorteile machen MSD zu einer soliden Alternative zu herkömmlichen kolorimetrischen Methoden wie ELISA für die Quantifizierung von Zytokinen.
Hier haben wir die MSD-Multi-Array-Zytokin-Testplatte eine Stunde lang bei Raumtemperatur (RT) mit einem Cocktail aus Capture-Antikörpern beschichtet, wodurch der Nachweis von Multiplexen von Entzündungsbiomarkern ermöglicht wurde. Anschließend haben wir Standardkurven, Qualitätskontrollen und Proben gemäß den regulatorischen Anforderungen der FDA für die Validierung bioanalytischer Methoden und die Probenanalyse vorbereitet. Anschließend wurden 1 %ige BSA-Blockierung, Standards, Qualitätskontrollen und Proben auf die beschichtete Platte gegeben und bei Raumtemperatur auf einem Schüttler inkubiert. Anschließend haben wir die überschüssigen oder ungebundenen Proteine in automatisierten Plattenwaschgeräten abgewaschen. Für den Nachweis hat unser Team SULFO-TAG-konjugierte Antikörper hinzugefügt und das ECL-Signal auf einem MSD-Imager erfasst.
Ergebnis
Wir haben einen zuverlässigen Multiplex-Zytokin-Test entwickelt und auf Mesoskala für den Nachweis und die Quantifizierung von Chemokinen und Zytokinen qualifiziert, der als wertvoller Multiplex-Test für Entzündungsbiomarker dient. Dieser Zytokin-Test wurde sorgfältig validiert und unterstützt weiterhin mehrere Projekte, die sich auf die Beurteilung des Entzündungsstatus konzentrieren.
Biomarker-Messungen gewinnen für das Verständnis des Krankheitsverlaufs und die Entwicklung von Therapien zunehmend an Bedeutung. Zytokin-Tests sind ein integraler Bestandteil dieses Prozesses, da Zytokine wichtige Mediatoren von Entzündungen und Immunreaktionen sind. Die Quantifizierung von Zytokinen liefert uns wertvolle Einblicke in den Krankheitsverlauf und die therapeutische Wirksamkeit. Dies unterstreicht die Bedeutung robuster Zytokin-Tests für ein besseres Verständnis verschiedener Krankheiten und die Steuerung der Entwicklung gezielter Therapien.
Die traditionelle ELISA-Plattform wird seit langem für ihre Effektivität bei der Quantifizierung eines einzelnen Analyten geschätzt. Die aufkommende MSD-Plattform bedeutet jedoch einen erheblichen Fortschritt im Bereich der Zytokin-Assays. Dank der Möglichkeit, mehrere Biomarker gleichzeitig zu analysieren, sorgt die MSD-Plattform für eine Revolution bei den Zytokin-Quantifizierungstests. Diese innovative Technologie bietet selbst bei komplexen biologischen Matrizen eine unübertroffene Genauigkeit und Präzision. Durch die Nutzung der Leistungsfähigkeit der MSD-Plattform können Forscher eine umfassende Quantifizierung von Zytokinen mit minimalen Probenvolumina realisieren. Diese Möglichkeit steigert die Effizienz von Untersuchungen zur Zytokinquantifizierung und eröffnet neue Wege zum Verständnis von Immunreaktionen und Entzündungsprozessen.
Von verschiedenen Aufsichtsbehörden registriert und geprüft
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