Vóór de dosering werden de TAs bereid in dimethylsulfoxide (DMSO), waardoor zuivere extractie- en kalibratiestandaarden en kwaliteitscontroles (QC's) vereist waren. De uitdaging bestond erin één enkele HPLC-UV-methode te ontwikkelen en te valideren waarmee alle TA's en hun mogelijke onzuiverheden in verschillende formuleringen tegelijkertijd konden worden gescheiden en gekwantificeerd, en deze methode toe te passen voor het testen van de TA's in de formulering. Dit omvatte de ontwikkeling van een HPLC-methode om een nauwkeurige en precieze analyse te garanderen.
Vervolgens werd de vastgestelde methode toegepast om de TA’s in de formulering te testen, wat het belang onderstreepte van de ontwikkeling van robuuste HPLC-UV-analysemethoden voor farmaceutische analyse. Bij de ontwikkeling van de chromatografische methode werd gebruikgemaakt van gradiëntelutie om de resolutie en gevoeligheid te verbeteren, wat de superioriteit van HPLC-UV ten opzichte van UV-spectrofotometrie bij complexe farmaceutische analyses nog eens onderstreepte in de vergelijking tussen HPLC en UV-spectrofotometrie. Het HPLC-UV-chromatogram werd gebruikt om de piekzuiverheid en resolutie van de analyten te beoordelen.
Oplossing
Voor de methodeontwikkeling en validatie van HPLC-UV werd een systematische aanpak gevolgd, in overeenstemming met de richtlijnen van de International Council for Harmonization (ICH). Tijdens de ontwikkeling van de HPLC-methode werden de chromatografische omstandigheden, zoals het kolomtype, de samenstelling van de mobiele fase, de pH, de stroomsnelheid en de detectiegolflengte, geoptimaliseerd met behulp van een strategie voor het ontwerpen van experimenten (DOE) om HPLC-UV-chromatogrammen van hoge kwaliteit te produceren. Door gebruik te maken van gradiëntelutie werden de robuustheid en efficiëntie van de HPLC-UV-analysemethode verder verbeterd om een optimale scheiding en resolutie van de analyten te garanderen, wat resulteerde in duidelijke en goed gedefinieerde HPLC-UV-chromatogrammen. Deze aanpak toont de voordelen van HPLC ten opzichte van UV-spectrofotometrie aan bij het bieden van superieure resolutie en specificiteit in farmaceutische analyse.
De validatie van de HPLC-UV-methode omvatte de prestatieparameters van de methode, zoals specificiteit, lineariteit, nauwkeurigheid, precisie, robuustheid, detectielimiet en kwantificatielimiet. De HPLC-UV-analysemethode werd gevalideerd voor elke TA en de bijbehorende onzuiverheden in de betreffende formuleringsmatrix. De methode werd ook getest op haar toepasbaarheid voor stabiliteitsonderzoeken van de TA’s in de formulering. Door gradiëntelutie te integreren in de ontwikkeling van de HPLC-methode werd dus een uitgebreid en betrouwbaar analytisch kader gecreëerd dat voldoet aan de strenge eisen van farmaceutische analyse. Dit onderstreept het belang van het gebruik van HPLC ten opzichte van UV-spectrofotometrie om nauwkeurige en accurate resultaten te bereiken in farmaceutisch onderzoek en ontwikkeling.
Resultaat
Er werd een robuuste en betrouwbare HPLC-UV-methode ontwikkeld en gevalideerd om vijf TA’s gelijktijdig te analyseren. De ontwikkeling van de HPLC-methode was cruciaal voor het bereiken van dit doel en zorgde voor een optimale scheiding en detectie van de analyten. Vanwege vergelijkbare structuren en retentietijden van twee sets TA’s werd de validatie van de HPLC-UV-analysemethode opgesplitst in twee validaties met dezelfde parameters. Een van de validaties betrof twee testartikelen, en de andere validatie werd uitgevoerd met de overige drie TA’s. De methode liet binnen 10 minuten een goede scheiding van alle analyten zien bij een golflengte van 254 nm, met behulp van een Agilent XDB-C18-kolom en een gradiëntelutie van acetonitril: methanol (1:1) met 0,1% mierenzuur en aangezuurd water met 0,1% mierenzuur. Deze gradiëntelutiestrategie maakte een effectieve scheiding van de doelanalyten mogelijk binnen een korte looptijd van 10 minuten, waardoor nauwkeurige kwantificering en detectie werden gewaarborgd. Gradiëntelutie staat erom bekend de chromatografische resolutie te verbeteren door de samenstelling van de mobiele fase in de loop van de tijd te variëren. Het HPLC-UV-chromatogram vertoonde duidelijke pieken voor elke analyt, wat de succesvolle scheiding en detectie van de doelverbindingen bevestigde.
De HPLC-UV-analysemethode was nauwkeurig en accuraat, met terugvindingspercentages tussen 95 en 105% en relatieve standaardafwijkingen van minder dan 5% voor alle analyten. De methode was robuust, zonder significante veranderingen in de resultaten onder verschillende experimentele omstandigheden. In vergelijking met UV-spectrofotometrie vertoonde de HPLC superieure precisie en nauwkeurigheid, wat het vertrouwen in de verkregen resultaten versterkte. De ontwikkelde HPLC-methode was gevoelig, met detectie- en kwantificatielimieten in het bereik van 50,00 tot 300,00 μg/mL voor alle analyten.
De methode werd met succes toegepast voor het stabiliteitsonderzoek van de TAs in de formulering bij kamertemperatuur en bij -70 °C gedurende maximaal 10 dagen, en de resultaten waren in overeenstemming met de specificaties. Het HPLC-UV-chromatogram bevestigde bovendien de specificiteit en betrouwbaarheid van de methode. De HPLC-UV-methode toonde haar veelzijdigheid en efficiëntie aan bij het analyseren van vijf TA’s en hun onzuiverheden in verschillende formuleringen en kan worden gebruikt voor kwaliteitscontrole en regelgevingsdoeleinden.
Neem contact op met onze wetenschapper over de ontwikkeling van uw HPLC-UV-methode: het testen van 9 artikelen in formuleringen
Gerelateerde artikelen
MSD-hybridisatie, ELISA, PK-immunoassayontwikkeling, GLP-validatie en oligonucleotideanalyse
TaqMan-genexpressietest, ontwikkeling van een test voor variatie in het aantal kopieën, nGLP-validatie en monsteranalyse
Analyse van genomische variatie – TaqMan-analyse van enkelvoudige nucleotidepolymorfismen (SNP's)
LC-MS-bioanalyse van antisense-oligonucleotiden (ASO) met behulp van massaspectrometrie en ionenpaarchromatografie
LC-MS-analyse van epigallocatechinegallaat (EGCG) in VcEDTA-menselijk serum
LC-MS-methode voor het bepalen van het aminozuur proline en hydroxyproline in muizenweefsels
LC-MS-methode voor de analyse van DNA-adducten in celgebaseerde in-vitro-monsters
LC-MS-methode voor medicijnafgiftesystemen met everolimus-afgevende coronaire stents
Massaspectrometrie van aminozuren, kwantitatieve LC-MS-aminozuuranalyse
Ontwikkeling van een LC-MS-methode en GLP-validatie voor de analyse van PK-plasmamonsters
Test voor heranalyse van verzamelde monsters (ISR), FDA-vereisten en evaluatie van het onderzoek
Bemonstering van gedroogde bloedvlekken (DBS), verzameling van DBS en analyse van DBS
Uw partner op het gebied van kwaliteit, veiligheid en naleving
De life sciences-sector vereist gespecialiseerde kennis en betrouwbare ondersteuning. Met onze brede expertise helpen we organisaties om te voldoen aan wet- en regelgeving, kwaliteit te waarborgen en met vertrouwen te blijven innoveren.